Qsamna diversi konsiderazzjonijiet il-ġimgħa li għaddiet għall-użu tal-elettroforesi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża, u aħna se nispiċċaw dan is-suġġett hawn illum għar-referenza tiegħek.
Għażla ta' Konċentrazzjoni tal-Buffer
Il-konċentrazzjoni tal-buffer użata fl-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża hija ġeneralment aktar baxxa minn dik użata fl-elettroforeżi tal-karta.Il-pH komunement użat 8.6Bbuffer arbital huwa tipikament magħżul fil-medda ta '0.05 mol/L sa 0.09 mol/L.Meta tagħżel il-konċentrazzjoni, issir determinazzjoni preliminari.Pereżempju, jekk it-tul tal-istrixxa tal-membrana bejn l-elettrodi fil-kamra tal-elettroforeżi huwa 8-10cm, vultaġġ ta '25V huwa meħtieġ għal kull ċentimetru ta' tul tal-membrana, u l-intensità tal-kurrent għandha tkun 0.4-0.5 mA għal kull ċentimetru ta 'wisa' tal-membrana.Jekk dawn il-valuri ma jintlaħqux jew ma jinqabżux waqt l-elettroforeżi, il-konċentrazzjoni tal-buffer għandha tiżdied jew tiġi dilwita.
Konċentrazzjoni ta 'buffer eċċessivament baxxa tirriżulta f'moviment mgħaġġel tal-meded u żieda fil-wisa' tal-faxxa.Min-naħa l-oħra, konċentrazzjoni ta 'buffer eċċessivament għolja tnaqqas il-veloċità tal-migrazzjoni tal-faxxa, u tagħmilha diffiċli biex tiddistingwi ċerti meded ta' separazzjoni.
Għandu jiġi nnutat li fl-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża, porzjon sinifikanti tal-kurrent jitmexxa permezz tal-kampjun, li jiġġenera ammont konsiderevoli ta 'sħana.Xi drabi, il-konċentrazzjoni tal-buffer magħżula tista' titqies xierqa.Madankollu, taħt kundizzjonijiet ta 'temperatura ambjentali miżjuda jew meta tuża vultaġġ ogħla, l-evaporazzjoni tal-ilma minħabba s-sħana tista' tintensifika, li tirriżulta f'konċentrazzjoni ta 'buffer eċċessivament għolja u saħansitra tikkawża li l-membrana tinxef.
Volum tal-Kampjun
Fl-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża, l-ammont tal-volum tal-kampjun huwa determinat minn diversi fatturi, inklużi l-kundizzjonijiet tal-elettroforeżi, il-proprjetajiet tal-kampjun innifsu, metodi ta 'tbajja' u tekniki ta' sejbien.Bħala prinċipju ġenerali, aktar ma jkun sensittiv il-metodu ta 'skoperta, iktar ikun żgħir il-volum tal-kampjun, li huwa ta' vantaġġ għas-separazzjoni.Jekk il-volum tal-kampjun huwa eċċessiv, il-mudelli ta 'separazzjoni elettroforetika jistgħu ma jkunux ċari, u t-tbajja' tista' wkoll tieħu ħafna ħin.Madankollu, meta jiġu analizzati kwantitattivament il-meded imtebbgħin separati bl-użu ta 'metodi ta' skoperta kolorimetrika ta 'eluzzjoni, il-volum tal-kampjun m'għandux ikun żgħir wisq, peress li jista' jirriżulta f'valuri ta 'assorbiment aktar baxxi għal ċerti komponenti, li jwasslu għal żbalji ogħla fil-kalkolu tal-kontenut tagħhom.F'każijiet bħal dawn, il-volum tal-kampjun għandu jiżdied b'mod xieraq.
Tipikament, il-volum tal-kampjun miżjud fuq kull ċentimetru tal-linja tal-applikazzjoni tal-kampjun ivarja minn 0.1 sa 5 μL, ekwivalenti għal ammont ta 'kampjun ta' 5 sa 1000 μg.Pereżempju, fl-analiżi ta 'elettroforesi tal-proteini tas-serum ta' rutina, il-volum tal-kampjun miżjud fuq kull ċentimetru tal-linja tal-applikazzjoni ġeneralment ma jaqbiżx 1 μL, ekwivalenti għal 60 sa 80 μg ta 'proteina.Madankollu, meta jiġu analizzati lipoproteini jew glikoproteini bl-użu tal-istess metodu ta 'elettroforeżi, il-volum tal-kampjun jeħtieġ li jiżdied b'mod korrispondenti.
Bħala konklużjoni, il-volum tal-kampjun l-aktar adattat għandu jintgħażel ibbażat fuq kundizzjonijiet speċifiċi permezz ta 'serje ta' esperimenti preliminari.
Għażla ta' Soluzzjoni tat-Tbajja'
Il-meded separati fl-elettroforesi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża huma tipikament imtebbgħin qabel is-sejbien.Komponenti ta 'kampjuni differenti jeħtieġu metodi ta' tbajja differenti, u l-metodi ta 'tbajja' adattati għall-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża jistgħu ma jkunux applikabbli għal kollox għall-karta tal-filtru.
Hemm tliet prinċipji ewlenin biex tagħżel is-soluzzjoni tat-tebgħa għalihommembrana tal-aċetat taċ-ċelluloża.L-ewwelnett,Iż-żebgħat li jinħall fl-ilma għandhom ikunu ppreferuti fuq iż-żebgħat li jinħall fl-alkoħol biex jiġi evitat li jinxtorob u deformazzjoni tal-membrana kkawżata mis-soluzzjoni tat-tebgħa ta 'l-aħħar.Wara t-tebgħa, huwa importanti li tlaħlaħ il-membrana bl-ilma u timminimizza t-tul tat-tbajja '.Inkella, il-membrana tista 'tiġi indivja jew tiċkien, li jaffettwa l-iskoperta sussegwenti.
It-tieni nett, huwa preferibbli li jintgħażlu żebgħa b'affinità qawwija ta 'tbajja' għall-kampjun.Fl-elettroforesi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża tal-proteini tas-serum, l-amino iswed 10B jintuża komunement minħabba l-affinità qawwija tat-tbajja tiegħu għal diversi komponenti tal-proteini tas-serum u l-istabbiltà tiegħu.
It-tielet nett, għandhom jintgħażlu żebgħa ta 'kwalità affidabbli.Xi żebgħa, minkejja li għandhom l-istess isem, jista 'jkun fihom impuritajiet li jirriżultaw fi sfond partikolarment skur wara t-tbajja'.Dan jista 'saħansitra ċċajpar il-meded oriġinarjament separati sew, li jagħmilha diffiċli biex jiddistingwuhom.
Fl-aħħar nett, l-għażla tal-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tat-tebgħa hija importanti.Teoretikament, jista 'jidher li konċentrazzjoni ogħla ta' soluzzjoni ta 'tbajja' twassal għal tbajja aktar bir-reqqa tal-komponenti tal-kampjun u riżultati ta 'tebgħa aħjar.Madankollu, dan mhuwiex il-każ.L-affinità li torbot bejn il-komponenti tal-kampjun u ż-żebgħa għandha ċertu limitu, li ma jiżdiedx maż-żieda fil-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tat-tebgħa.Għall-kuntrarju, konċentrazzjoni ta 'soluzzjoni ta' tbajja għolja eċċessivament mhux biss taħli ż-żebgħa iżda wkoll tagħmilha diffiċli biex jinkiseb sfond ċar.Barra minn hekk, meta l-intensità tal-kulur tilħaq ċertu valur massimu, il-kurva tal-assorbiment taż-żebgħa ma ssegwix relazzjoni lineari, speċjalment f'kejl kwantitattiv. Fl-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża, il-konċentrazzjoni tas-soluzzjoni tat-tebgħa hija ġeneralment aktar baxxa minn dik użata fl-elettroforeżi tal-karta.
Dettalji biex tkun taf dwar Beijing Liuyi Biotechnology's membrana tal-aċetat taċ-ċellulożatank tal-elettroforeżi u l-applikazzjoni tal-elettroforeżi tiegħu, jekk jogħġbok żur hawn:
lEsperiment għas-separazzjoni tal-proteina tas-serum permezz tal-Membrana tal-Aċetat taċ-Ċelluloża
lElettroforesi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża
Jekk għandek xi pjan ta 'xiri għall-prodotti tagħna, jekk jogħġbok ikkuntatjana.Tista' tibgħatilna messaġġ bl-email[email protetta]jew[email protetta], jew jekk jogħġbok ċempelna fuq +86 15810650221 jew żid Whatsapp +86 15810650221, jew Wechat: 15810650221.
Referenza:Electrophoresis(It-Tieni edizzjoni) mis-Sur Li
Ħin tal-post: Ġunju-06-2023