X'inhi l-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide?

Elettroforesi tal-Ġell tal-Polyacrylamide

L-elettroforeżi tal-ġel hija teknika fundamentali fil-laboratorji madwar id-dixxiplini bijoloġiċi, li tippermetti s-separazzjoni ta 'makromolekuli bħal DNA, RNA u proteini. Mezzi u mekkaniżmi ta 'separazzjoni differenti jippermettu li sottosettijiet ta' dawn il-molekuli jiġu separati b'mod aktar effettiv billi jisfruttaw il-karatteristiċi fiżiċi tagħhom. Għall-proteini b'mod partikolari, l-elettroforeżi tal-ġel tal-polyacrylamide (PAGE) ħafna drabi hija t-teknika tal-għażla.

PAGE hija teknika li tissepara makromolekuli bħal proteini bbażati fuq il-mobilità elettroforetika tagħhom, jiġifieri, l-abbiltà tal-analiti li jimxu lejn elettrodu ta 'ċarġ oppost. Fil-PAĠNA, dan huwa determinat mill-ħlas, id-daqs (piż molekulari) u l-għamla tal-molekula. L-analiti jiċċaqilqu minn ġol-pori ffurmati fil-ġel tal-polyacrylamide. B'differenza mid-DNA u l-RNA, il-proteini jvarjaw inkarigati skond l-aċidi amminiċi inkorporati, li jistgħu jinfluwenzaw kif jimxu. Kordi ta 'aċidi amminiċi jistgħu wkoll jiffurmaw strutturi sekondarji li jħallu impatt fuq id-daqs apparenti tagħhom u konsegwentement kif huma kapaċi jimxu mill-pori. Għalhekk xi kultant jista' jkun mixtieq li l-proteini jiġu żnaturati qabel l-elettroforeżi biex jiġu linearizzati jekk tkun meħtieġa stima aktar preċiża tad-daqs.

PAĠNA SDS

L-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide tas-sodju-dodecyl sulfate hija teknika użata biex tissepara molekuli ta 'proteini ta' mases 5 sa 250 kDa. Il-proteini huma separati biss fuq il-bażi tal-piż molekulari tagħhom. Sodium dodecyl sulfate, surfactant anjoniku, huwa miżjud fil-preparazzjoni ta 'ġellijiet li jaħbu l-piżijiet intrinsiċi tal-kampjuni tal-proteini u jagħtihom proporzjon ta' ħlas simili għal massa. Fi kliem sempliċi, jiddenatura l-proteini u jagħtihom ħlas negattiv.

PAĠNA Nattiva

PAĠNA Nattiva hija teknika li tuża ġellijiet mhux żnaturati għas-separazzjoni tal-proteini. B'differenza mill-SDS PAGE, l-ebda aġent denaturant ma huwa miżjud fil-preparazzjoni tal-ġels. Bħala riżultat, is-separazzjoni tal-proteini sseħħ fuq il-bażi tal-ħlas u d-daqs tal-proteini. F'din it-teknika, il-konformazzjoni, it-tiwi u l-ktajjen tal-aċidu amminiku tal-proteini huma l-fatturi li s-separazzjoni tiddependi fuqhom. Il-proteini ma ssirilhomx ħsara f'dan il-proċess, u jistgħu jiġu rkuprati wara t-tlestija tas-separazzjoni.

Kif taħdem l-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide (PAGE)?

Il-prinċipju bażiku ta 'PAGE huwa li tissepara l-analiti billi tgħaddihom mill-pori ta' ġel tal-polyacrylamide bl-użu ta 'kurrent elettriku. Biex jinkiseb dan, taħlita ta 'acrylamide-bisacrylamide hija polimerizzata (polyacrylamide) biż-żieda ta' ammonju persulfate (APS). Ir-reazzjoni, li hija katalizzata minn tetramethylethylenediamine (TEMED), tifforma struttura bħal xibka b'pori li permezz tagħhom l-analiti jistgħu jiċċaqilqu (Figura 2). Iktar ma jkun għoli l-perċentwal ta 'akrilamide totali inkluż fil-ġell, iżgħar ikun id-daqs tal-pori, għalhekk iżgħar il-proteini li jkunu jistgħu jgħaddu. Il-proporzjon ta 'acrylamide għal bisacrylamide se jkollu impatt ukoll fuq id-daqs tal-pori iżda dan ħafna drabi jinżamm kostanti. Daqsijiet iżgħar tal-pori wkoll inaqqsu l-veloċità li biha proteini żgħar jistgħu jimxu permezz tal-ġel, itejbu r-riżoluzzjoni tagħhom u jipprevjenuhom milli jispiċċaw fil-buffer malajr meta jiġi applikat il-kurrent.

Tagħmir għall-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Ċellula ta' Elettroforeżi tal-Ġell (Tank/Kamra)
It-tank tal-ġel għall-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide (PAGE) huwa differenti mit-tank tal-ġell tal-agarose. It-tank tal-ġel tal-agarose huwa orizzontali, filwaqt li t-tank PAGE huwa vertikali. Permezz ta 'ċellula elettroforeżi vertikali (tank/kamra), ġel irqiq (normalment 1.0mm jew 1.5mm) jitferra' bejn żewġ pjanċi tal-ħġieġ u mmuntat sabiex il-qiegħ tal-ġell jiġi mgħaddas f'buffer f'kamra waħda u l-parti ta 'fuq tkun mgħaddsa f'buffer f’kamra oħra. Meta jiġi applikat il-kurrent, ammont żgħir ta 'buffer jemigra mill-ġell mill-kamra ta' fuq għall-kamra tal-qiegħ. Bi klampi b'saħħithom biex jiggarantixxu li l-assemblaġġ jibqa 'f'pożizzjoni wieqfa, it-tagħmir jiffaċilita ġirjiet veloċi tal-ġel b'tkessiħ uniformi li jirriżulta f'meded distinti.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) timmanifattura firxa ta 'daqsijiet ta' ċelluli tal-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide (tankijiet/kmamar). Il-mudelli DYCZ-20C u DYCZ-20G huma ċelluli ta 'elettroforeżi vertikali (tankijiet/kmamar) għall-analiżi tas-sekwenzjar tad-DNA. Uħud miċ-ċelloli tal-elettroforeżi vertikali (tankijiet/kmamar) huma kompatibbli mas-sistema ta 'blotting, bħall-mudell DYCZ-24DN, DYCZ-25D u DYCZ-25E huma kompatibbli mal-mudell tas-sistema Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G u DYCZ-40F, li huma użati għat-trasferiment tal-molekula tal-proteina mill-ġel għall-membrana. Wara l-elettroforeżi SDS-PAGE, Western Blotting hija teknika biex tiskopri proteina speċifika f'taħlita ta 'proteini. Tista 'tagħżel dawn is-sistemi ta' blotting skond ir-rekwiżiti sperimentali.

Provvista tal-Enerġija tal-Electrophoresis
Biex tipprovdi l-elettriku għat-tħaddim tal-ġell, ser ikollok bżonn provvista ta 'enerġija elettroforeżi. Fil-Bijoteknoloġija Liuyi nipprovdu firxa ta 'provvisti ta' enerġija elettroforeżi għall-applikazzjonijiet kollha. Il-mudell DYY-12 u DYY-12C b'vultaġġ u kurrent stabbli għoli jista 'jissodisfa l-elettroforeżi ta' rekwiżit ta 'vultaġġ għoli. Għandu l-funzjoni ta 'stand, ħin, VH u applikazzjoni pass pass. Huma ideali għall-applikazzjoni tal-elettroforeżi tas-sekwenza tal-IEF u tad-DNA. Għall-applikazzjoni ġenerali tal-proteina u l-elettroforeżi tad-DNA, għandna l-mudell DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, eċċ, li huma wkoll provvisti ta 'enerġija ta' bejgħ sħun b'ċelloli elettroforeżi (tankijiet/kmamar). Dawn jistgħu jintużaw għall-applikazzjonijiet tal-elettroforeżi ta 'vultaġġ medju u baxx, bħal għall-użu tal-laboratorju tal-iskola, laboratorju tal-isptar eċċ. Aktar mudelli għal provvisti ta 'enerġija, jekk jogħġbok żur il-websajt tagħna.

Il-marka Liuyi għandha aktar minn 50 sena storja fiċ-Ċina u l-kumpanija tista 'tipprovdi prodotti stabbli u ta' kwalità għolja madwar id-dinja kollha. Permezz ta 'żvilupp ta' snin, huwa denju tal-għażla tiegħek!

Għal aktar informazzjoni dwarna, jekk jogħġbok ikkuntattjana bl-email[email protetta] or [email protetta].

Referenzi għal X'inhi l-elettroforesi tal-ġel tal-polyacrylamide?
1. Karen Steward PhD Elettroforeżi tal-ġel tal-Polyacrylamide, Kif Taħdem, Varjanti ta' Teknika, u l-applikazzjonijiet tagħha