Ottimizzazzjoni tal-Electrophoresis tal-Ġel: L-Aħjar Prattiki għall-Volum tal-Kampjun, il-Vultaġġ, u l-Ħin

Introduzzjoni

L-elettroforeżi tal-ġel hija teknika fundamentali fil-bijoloġija molekulari, użata ħafna għas-separazzjoni ta 'proteini, aċidi nuklejċi, u makromolekuli oħra. Il-kontroll xieraq tal-volum tal-kampjun, il-vultaġġ, u l-ħin tal-elettroforeżi huwa kruċjali biex jinkisbu riżultati preċiżi u riproduċibbli.Il-kollega tal-laboratorju tagħna joffril-aħjar prattiki għall-ġestjoni ta’ dawn il-parametri waqt l-elettroforeżi tal-ġel SDS-PAGE.

3

Beijing Liuyi Biotechnology ġel elettroforesi prodotti

Volum tal-Kampjun: Żgurar tal-Konsistenza

Meta twettaq l-elettroforeżi SDS-PAGE, il-volum tal-kampjun huwa fattur ewlieni li jista 'jħalli impatt sinifikanti fuq ir-riżoluzzjoni tar-riżultati tiegħek. Ġeneralment huwa rakkomandat li tgħabbi 10 µL ta' proteina totali għal kull bir. Biex tiġi żgurata l-konsistenza u tiġi evitata d-diffużjoni tal-kampjuni bejn il-bjar li jmissu magħhom, huwa importanti li titgħabba volum ugwali ta '1x loading buffer fi kwalunkwe bjar vojta. Din il-prekawzjoni tgħin biex tipprevjeni t-tixrid ta 'kampjuni f'korsiji ġirien, li jista' jseħħ jekk il-bir jitħalla vojt.

Qabel ma tagħbija l-kampjuni tiegħek, dejjem ibda billi żżid markatur tal-piż molekulari f'bir wieħed. Dan jippermetti identifikazzjoni faċli tad-daqsijiet tal-proteini wara l-elettroforeżi.

1

Kontroll tal-Vultaġġ: Veloċità tal-Ibbilanċjar u Riżoluzzjoni

Il-vultaġġ applikat waqt l-elettroforeżi jaffettwa direttament kemm il-veloċità li biha l-kampjuni jemigraw mill-ġell kif ukoll ir-riżoluzzjoni tas-separazzjoni. Għal SDS-PAGE, huwa rakkomandabbli li tibda b'vultaġġ baxx ta 'madwar 80V. Dan il-vultaġġ baxx inizjali jippermetti li l-kampjuni jemigraw bil-mod u b'mod uniformi, u jikkonċentrawhom f'faxxa li jaqtgħu hekk kif jidħlu fil-ġell li jissepara.

Ladarba l-kampjuni jkunu daħlu bis-sħiħ fil-ġel tas-separazzjoni, il-vultaġġ jista 'jiżdied għal 120V. Dan il-vultaġġ ogħla jaċċellera l-migrazzjoni, u jiżgura li l-proteini huma separati b'mod effiċjenti skont il-piż molekulari tagħhom. Huwa essenzjali li jiġi mmonitorjat il-progress tal-faċċata taż-żebgħa blu tal-bromophenol, li tindika t-tlestija tal-elettroforeżi. Għal ġellijiet b'konċentrazzjoni ta '10-12%, 80-90 minuta huma tipikament biżżejjed; madankollu, għal ġels ta '15%, jista' jkollok bżonn testendi l-ħin tat-tħaddim ftit.

Ġestjoni tal-Ħin: Jafu Meta Tieqaf

Iż-żmien huwa fattur kritiku ieħor fl-elettroforesi tal-ġel. It-tħaddim tal-ġel għal perjodu twil jew qasir wisq jista 'jwassal għal separazzjoni subottimali. Il-migrazzjoni taż-żebgħa blu tal-bromophenol hija indikatur utli: meta tilħaq il-qiegħ tal-ġell, ġeneralment ikun żmien li twaqqaf il-ġirja. Għal ġels standard, bħal 10-12%, tul ta 'elettroforeżi ta' madwar 80-90 minuta huwa tipikament adegwat. Għal ġels perċentwali ogħla, bħal 15%, il-ħin tat-tħaddim għandu jiġi estiż biex tiġi żgurata separazzjoni sħiħa tal-proteini.

Ġestjoni tal-Buffers: Użu mill-ġdid u Preparazzjoni tal-Buffers

Il-buffer tal-elettroforesi jista' jerġa' jintuża 1-2 darbiet, skont il-kundizzjonijiet speċifiċi tal-laboratorju tiegħek. Madankollu, għal riżultati ottimali, huwa rakkomandat li tipprepara buffer 10x frisk u ħallat eżatt qabel l-użu. Dan jiżgura li l-buffer iżomm l-effettività tiegħu, li jwassal għal riżultati ta 'elettroforeżi aktar affidabbli.

2

Beijing Liuyi Biotechnology ġel elettroforesi prodotti

Billi tikkontrolla bir-reqqa l-volum tal-kampjun, il-vultaġġ, u l-ħin tal-elettroforeżi, tista 'ttejjeb b'mod sinifikanti l-eżattezza u r-riproduċibilità tar-riżultati tal-elettroforeżi tal-ġel tiegħek. L-implimentazzjoni ta' dawn l-aħjar prattiki fix-xogħol tal-laboratorju tiegħek tgħinek tikseb meded aktar ċari u distinti, li jwasslu għal dejta aħjar għal analiżi downstream.

Jekk għandek aktar metodi tajbin biex tottimizza l-esperiment tal-elettroforesi tal-ġel, merħba tiddiskuti magħna!

Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) speċjalizzat fil-manifattura ta 'strumenti ta' elettroforeżi għal aktar minn 50 sena mat-tim tekniku professjonali tagħna stess u ċ-ċentru ta 'R&D. Għandna linja ta 'produzzjoni affidabbli u kompluta mid-disinn sa spezzjoni, u maħżen, kif ukoll appoġġ għall-kummerċjalizzazzjoni. Il-prodotti ewlenin tagħna huma Electrophoresis Cell (tank/chamber), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System eċċ Aħna wkoll nipprovdu l-istrumenti tal-laboratorju bħal strument PCR, vortex mixer u ċentrifugi għal-laboratorju.

Jekk għandek xi pjan ta 'xiri għall-prodotti tagħna, jekk jogħġbok ikkuntatjana. Tista' tibgħatilna messaġġ bl-email[email protetta]jew[email protetta], jew jekk jogħġbok ċempelna fuq +86 15810650221 jew żid Whatsapp +86 15810650221, jew Wechat: 15810650221.

Jekk jogħġbok Skennja l-kodiċi QR biex iżżid fuq Whatsapp jew WeChat.

2


Ħin tal-post: Awissu-20-2024