Esperiment ta 'elettroforeżi ta' l-emoglobina

Prinċipju tal-Esperiment

L-elettroforeżi tal-emoglobina għandha l-għan li tiskopri u tikkonferma diversi emoglobini normali u anormali.

Minħabba l-piżijiet differenti u l-punti iżoelettriċi ta 'tipi differenti ta' emoglobina, f'ċerta soluzzjoni buffer tal-pH, meta l-punt iżoelettriku tal-emoglobina huwa aktar baxx mill-pH tas-soluzzjoni buffer, l-emoglobina ġġorr ħlas negattiv u temigra lejn l-anodu waqt l-elettroforeżi. Bil-maqlub, l-emoglobina b'ċarġ pożittiv timxi lejn il-katodu.

Taħt ċertu vultaġġ u wara żmien speċifiku ta 'elettroforeżi, l-emoglobini b'piżijiet u piżijiet molekulari differenti juru direzzjonijiet u veloċitajiet ta' migrazzjoni differenti. Dan jippermetti s-separazzjoni ta 'żoni distinti, u analiżi ta' skanjar kolorimetrika jew elettroforetika sussegwenti tista 'titwettaq fuq dawn iż-żoni biex tikkwantifika diversi emoglobini. L-iktar metodu użat huwa l-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża ta 'pH 8.6.

Fi ħdan iċ-ċitoplasma, gruppi ta 'ethylene glycol (CHOH-CHOH) preżenti f'sustanzi ta' glycogen jew polysaccharide (bħal mucopolysaccharides, mucoproteins, glycoproteins, glycolipids, eċċ.) Huma ossidizzati minn aċidu perjodiku u konvertiti fi gruppi aldehyde (CHO-CHO). Dawn il-gruppi ta 'aldehyde jingħaqdu mar-reaġent Schiff bla kulur vjola-aħmar, li jiffurmaw żebgħa vjola-aħmar li jiddepożita fejn il-polisakkaridi huma preżenti fiċ-ċellula. Din ir-reazzjoni hija magħrufa bħala tbajja perjodika ta 'aċidu-Schiff (PAS), li qabel kienet imsejħa tbajja ta' glycogen.

Metodu ta 'Esperiment

Materjali:Aċetat taċ-ċellulożamembrane, apparat tal-elettroforeżi(DYCP-38C u provvista ta 'enerġija DYY-6C), Għodda Superjuri għat-Tagħbija tal-Kampjuni(pipetta), spettrofotometru, kuvettes kolorimetriċi, buffers.

Buffer:

(1) pH 8.6 TEB Buffer: Iżen 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g aċidu boriku, u żid ilma distillat sa 1000 ml.

(2) Borat Buffer: Iżen 6.87 g borax u 5.56 g aċidu boriku, u żid ilma distillat sa 1000 ml.

Proċedura:

Ptiswija tas-Soluzzjoni tal-emoglobina

Ħu 3 ml demm li jkun fih eparina jew ċitrat tas-sodju bħala antikoagulant. Iċċentrifuga f'2000 rpm għal 10 minuti u armi l-plażma. Aħsel iċ-ċelluli ħomor tad-demm tliet darbiet b'salina fiżjoloġika (750 rpm, 5 minuti ċentrifugazzjoni kull darba). Iċċentrifuga f'2200 rpm għal 10 minuti u armi s-supernatant. Żid ammont ugwali ta 'ilma distillat, imbagħad żid 0.5 darbiet il-volum ta' tetraklorur tal-karbonju. Ħawwad bil-qawwa għal 5 minuti, u mbagħad ċentrifuga f'2200 rpm għal 10 minuti biex tiġbor is-soluzzjoni ta' Hb ta' fuq għal użu aktar tard.

Tixrib tal-Membrana

Aqta' l-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża fi strixxi li jkejlu 3 ċm × 8 ċm. Xarrabhom f'pH 8.6 TEB buffer sakemm ikunu kompletament saturati, imbagħad neħħi u nixxef b'karta tal-filtru.

Spotting

Uża pipetta biex tidentifika 10 μl tas-soluzzjoni tal-emoglobina vertikalment fuq il-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża (in-naħa mhux maħduma), madwar 1.5 ċm mit-tarf.

Elettroforeżi

Ferra s-soluzzjoni buffer tal-borat fil-kamra tal-elettroforeżi. Poġġi l-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża bin-naħa spotted fit-tarf tal-katodu tal-kamra. Mexxi f'200 V għal 30 minuta.

Elużjoni

Aqta' ż-żoni HbA u HbA2, poġġihom f'tubi tat-test separati, u żid 15 ml u 3 ml ta' ilma distillat, rispettivament. Ħawwad bil-mod biex tneħħi l-emoglobina kompletament, imbagħad ħawwad.

Kolorimetrija

Żero l-assorbiment bl-użu ta' ilma distillat għas-soluzzjoni ta' elużjoni u kejjel l-assorbiment f'415 nm.

Kalkolu

HbA2(%) = Assorbenza tat-tubu HbA2 / (Assorbenza tat-tubu HbA × 5 + Assorbenza tat-tubu HbA2) × 100%

Kalkolu tar-Riżultati Sperimentali

Medda ta' Referenza għal pH 8.6 TEB Buffer Cellulose Acetate Electrophoresis: HbA > 95%, HbA2 1% -3.1%

Noti

Il-ħin tal-elettroforeżi m'għandux ikun twil wisq. Il-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża m'għandhiex tinxef waqt l-elettroforeżi. Waqqaf l-elettroforeżi meta HbA u HbA2 huma separati b'mod ċar. L-elettroforeżi fit-tul tista 'tikkawża diffużjoni tal-faxxa u ċajpir.

Evita li tuża wisq kampjun. Likwidu eċċessiv tal-emoglobina jista 'jwassal għal distakk tal-faxxa jew tbajja insuffiċjenti, li jirriżulta f'livelli ta' HbA elevati b'mod falz.

Evita l-kontaminazzjoni tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża bi proteini.

Il-kurrent m'għandux ikun għoli wisq; inkella, il-meded tal-emoglobina jistgħu ma jisseparawx.

Dejjem inkludi kampjuni minn individwi normali u emoglobini anormali magħrufa meħtieġa bħala kontrolli.

Beijing Liuyi Biotechnology timmanifattura t-tank tal-elettroforeżi professjonali għall-elettroforeżi tal-emoglobina li huwa l-mudellDYCP-38Ctank tal-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża, u hemm żewġ mudelli ta 'provvista tal-enerġija tal-elettroforeżi disponibbli għat-tank tal-elettroforeżi tal-membrana tal-aċetat taċ-ċellulożaDYY-2CuDYY-6Cprovvista ta 'enerġija.

Sadanittant, Beijing Liuyi Biotechnology tipprovdi membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża għall-klijenti, u d-daqs tal-membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża jista 'jiġi personalizzat. Merħba biex titlobna għal kampjuni u aktar informazzjoni.

Il-marka Beijing Liuyi għandha aktar minn 50 sena storja fiċ-Ċina u l-kumpanija tista 'tipprovdi prodotti stabbli u ta' kwalità għolja madwar id-dinja kollha. Permezz ta 'snin ta' żvilupp, huwa denju tal-għażla tiegħek!

Issa qed infittxu msieħba, kemm it-tank tal-elettroforeżi OEM kif ukoll id-distributuri huma milqugħa.

Jekk għandek xi pjan ta 'xiri għall-prodotti tagħna, jekk jogħġbok ikkuntatjana. Tista' tibgħatilna messaġġ bl-email[email protetta]jew[email protetta], jew jekk jogħġbok ċempelna fuq +86 15810650221 jew żid Whatsapp +86 15810650221, jew Wechat: 15810650221