Prinċipju
L-elettroforeżi tal-film tal-aċetat taċ-ċelluloża hija metodu tal-elettroforeżi li juża film tal-aċetat taċ-ċelluloża bħala appoġġ. Il-fenomenu li fih partiċelli ċċarġjati jimxu lejn l-elettrodu oppost taħt l-azzjoni tal-kamp elettriku jissejjaħ elettroforeżi. Peress li kull proteina għandha punt iżoelettriku speċifiku, jekk proteina titqiegħed f'soluzzjoni b'pH aktar baxx mill-punt iżoelettriku tagħha, il-proteina tkun iċċarġjata b'mod pożittiv u timxi lejn l-elettrodu negattiv. Għall-kuntrarju, jiċċaqlaq għall-arblu pożittiv. Minħabba li l-veloċità tal-molekuli tal-proteini li jiċċaqalqu f'kamp elettriku hija relatata mal-ħlas tagħhom, il-forma u d-daqs tal-molekuli, proteini differenti jistgħu jiġu sseparati permezz ta 'elettroforeżi. Is-serum fih varjetà ta 'proteini, li kollha għandhom punti iżoelettriċi f'pH7.5 jew inqas. Meta s-serum jitqiegħed f'pH 8.6 buffer biex imexxi l-elettroforeżi, il-proteini kollha tas-serum huma ċċarġjati b'mod negattiv u se jimxu lejn in-naħa pożittiva fil-kamp elettriku. Peress li diversi proteini tas-serum għandhom ħlasijiet differenti fl-istess pH, il-partiċelli molekulari huma differenti fid-daqs, u għalhekk il-veloċità tal-migrazzjoni hija differenti, u huma separati permezz ta 'elettroforeżi. Il-punti iżoelettriċi u l-piżijiet molekulari tal-proteini tas-serum huma murija fit-tabella hawn taħt:
| Proteina | Punti iżoelettriċi (PI) | Piż molekulari |
| Albumina | 4.88 | 69 000 |
| α1-gloulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gloulin | 6.85 ~ 7.50 | 156 000 ~ 300 000 |
L-esperiment huwa li jiġu separati proteini differenti fis-serum tad-demm b'membrana tal-aċetat taċ-ċelluloża (abbr. CAM) bħala midja ta 'appoġġ. CAM huwa tip ta 'loos bil-fowmefilm b'uniformi tajba, u l-ħxuna hija 0.1mm-1.5mm, li għandha ċertu assorbiment ta 'ilma.
Materjali, strumenti u reaġenti għall-elettroforesi CAM
Kampjuni:serum tad-demm uman b'saħħtu
Strument:provvista ta 'enerġija DYY-6C, tank ta' elettroforeżi DYCP-38C, tagħbija ta 'kampjun superjuri WD-9404
Ir-reaġenti
1) membrana aċetat taċ-ċelluloża 7X9cm
2) Soluzzjoni buffer PH 8.6 barbitol (qawwa jonika 0.05-0.09, huwa ħin 0.06tid.): Ħu 1,84g Diethyl barbituric acid, u mbagħad ħu 1.03g Diethyl sodium pentobarbital, żid ftit ilma distillat biex issaħħan biex jinħall, u agħmel sa 1000ml;
3) Tebgħa: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, żid 100ml ilma distillat;
4) TBS/T jew PBS/T: 45ml 95% etanol, 5ml aċidu aċetiku glaċjali, żid 50ml ilma distillat;
5) Soluzzjoni tat-Tindif: 70ml etanol anidru, 30ml aċidu aċetiku glaċjali.
Esperiment Method
1) Ipprepara l-membrana: Għaddas il-membrana fis-soluzzjoni buffer barbitol 30min-8h, u oħroġ, neħħi s-soluzzjoni żejda b'karta assorbenti.
2) Tagħbija tal-kampjuni: Iddistingwi n-naħa mhux maħduma u n-naħa lixxa tal-membrana, u mmarka linja f'distanza ta '1.5cm sat-tarf ta' fuq fuq in-naħa mhux maħduma. Tagħbija kampjuni b'għodda ta 'tagħbija ta' kampjun superjuri fuq in-naħa mhux maħduma. Nota: Il-kampjuni għandhom jitgħabbew fuq in-naħa mhux maħduma tal-membrana. Wara li l-kampjuni tas-serum huma ppenetrati bis-sħiħ fil-membrana, aqleb il-membrana, poġġi n-naħa mhux maħduma (bil-kampjuni) wiċċ 'l isfel għat-tank, u t-tarf bil-kampjuni jitqiegħed f'elettrodu negattiv.
3) Elettroforesi: Ixgħel il-provvista tal-enerġija, 0.4～0.6m A/cm membrana, il-ħin tat-tħaddim huwa 30-45 min. Wara li taħdem l-elettroforeżi, itfi l-enerġija.
4) Tebgħa u nadif: Oħroġ il-membrana mit-tank, u għaddasit fis-soluzzjoni taż-żebgħa għal 5 minuti, u mbagħad naddafha fis-soluzzjoni tat-tindif aktar u aktar għal 3-4 darbiet sakemm il-kulur fl-isfond ikun ċar. Il-proteini tas-serum għandhom jintwerew fuq il-meded, u normalment ikun hemm ħames żoni, jiffurmaw tarf ta 'fuq għal-linja mmarkata, Albumina, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Preservazzjoni: poġġi l-electrtophoresis niexfabandf'soluzzjoni tat-tindif għal 10-15-il minuta, u mbagħad neħħiha u waħħalha fuq ħġieġ nadif, wara li tinxef, issir film trasparentiband.
EsperimentRiżultat
L-effett ta 'separazzjoni tal-kampjuni tas-serum huwa tajjeb, u m'hemm l-ebda fenomenu ta' band tailing. Ir-ripetibbiltà tar-riżultati tvarja minħabba l-proċeduri tat-test u l-metodi tal-esperimentatur, u r-ripetibbiltà hija għolja.
Konklużjoni
Is-sistema ta 'skoperta ta' elettroforeżi klinika rapida (Tank tal-elettroforeżiDYCP-38C,provvista ta 'enerġijaDYY-6C u tagħbija ta 'kampjun superjuri WD-9404) prodotta minn tagħnakumpanija Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdjissodisfa r-rekwiżiti sperimentali,uir-riżultati huma riproduċibbli, sempliċi u veloċi, adattati għaltagħlimriċerka.
Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd tispeċjalizza fil-manifattura ta 'prodotti ta' elecrtophoresis għall-industrija tax-xjenza tal-ħajja, ligħandha aktar minn 50 sena storja fiċ-Ċina u l-kumpanija tista 'tipprovdi prodotti stabbli u ta' kwalità għolja madwar id-dinja. Permezz ta 'snin ta' żvilupp, huwa denju tal-għażla tiegħek!
Issa qed infittxu msieħba, kemm it-tank tal-elettroforeżi OEM kif ukoll id-distributuri huma milqugħa.
Għal aktar informazzjoni dwarna, jekk jogħġbok ikkuntattjana bl-email[email protetta]jew[email protetta].
Ħin tal-post: Nov-14-2022