Comet Assay: Teknika Sensittiva għall-Individwazzjoni ta' Ħsara u Tiswija tad-DNA

Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) hija teknika sensittiva u rapida primarjament użata biex tiskopri ħsara u tiswija tad-DNA f'ċelloli individwali. L-isem "Comet Assay" ġej mill-forma karatteristika bħal kometa li tidher fir-riżultati: in-nukleu taċ-ċellula jifforma r-"ras", filwaqt li l-frammenti tad-DNA bil-ħsara jemigraw, u joħolqu "denb" li jixbaħ kometa.

Prinċipju

Il-prinċipju tal-Comet Assay huwa bbażat fuq il-migrazzjoni ta 'frammenti tad-DNA f'kamp elettriku. DNA intatt jibqa’ fin-nukleu taċ-ċellula, filwaqt li DNA bil-ħsara jew frammentat jemigra lejn l-anodu, u jifforma d-“denb” tal-kometa. It-tul u l-intensità tad-denb huma direttament proporzjonali għall-firxa tal-ħsara fid-DNA.

Proċedura

1. Preparazzjoni taċ-Ċelloli: Iċ-ċelloli li għandhom jiġu ttestjati jitħalltu ma 'agarose b'punt ta' tidwib baxx u jinfirxu fuq slides tal-mikroskopju biex jiffurmaw saff uniformi.
2. Liżi taċ-Ċelloli: Il-pjastri huma mgħaddsa f'soluzzjoni ta 'liżi biex tneħħi l-membrana taċ-ċellula u l-membrana nukleari, u tesponi d-DNA.
3. Elettroforeżi: Is-slajds jitqiegħdu f'kamra tal-elettroforeżi taħt kundizzjonijiet alkalini jew newtrali. Frammenti tad-DNA bil-ħsara jemigraw lejn l-elettrodu pożittiv taħt l-influwenza tal-kamp elettriku.
4. Tbajja: Wara l-elettroforeżi, is-slajds huma mtebbgħin b'żebgħa fluworexxenti (eż., ethidium bromide) biex jivviżwalizzaw id-DNA.
5. Analiżi Mikroskopika: Bl-użu ta 'mikroskopju fluworexxenti jew softwer speċjalizzat, il-forom tal-kometa jiġu analizzati, u parametri bħat-tul tad-denb u l-intensità huma mkejla.

Immaġni minn biorender

Analiżi tad-Dejta

Ir-riżultati mill-Assaġġ Comet huma evalwati abbażi ta’ diversi parametri ewlenin:

• Tul tad-denb: Jirrappreżenta d-distanza li d-DNA jemigra, li tindika l-estent tal-ħsara lid-DNA.
• Kontenut tad-DNA tad-denb: Il-perċentwal tad-DNA li jemigra fid-denb, spiss użat bħala kejl kwantitattiv tal-ħsara fid-DNA.
• Mument tad-denb taż-żebbuġa (OTM): Tikkombina kemm it-tul tad-denb kif ukoll il-kontenut tad-DNA tad-denb biex tipprovdi kejl aktar komprensiv tal-ħsara fid-DNA.

Applikazzjonijiet

1. Studji tal-ġenotossiċità: Il-Comet Assay huwa użat ħafna biex jivvaluta l-effetti ta 'kimiċi, drogi, u radjazzjoni fuq id-DNA taċ-ċelluli, li jagħmilha għodda ewlenija għall-ittestjar tal-ġenotossiċità.
2. Tossikoloġija Ambjentali: Jgħin fl-analiżi tal-impatt tas-sustanzi li jniġġsu ambjentali fuq id-DNA tal-organiżmi, u jipprovdi għarfien dwar is-sikurezza tal-ekosistema.
3. Riċerka Medika u Klinika: Il-Comet Assay jintuża fl-istudju tal-mekkaniżmi tat-tiswija tad-DNA, il-kanċer, u mard ieħor relatat mad-DNA. Jevalwa wkoll l-impatt tat-terapiji tal-kanċer bħar-radjuterapija u l-kimoterapija fuq id-DNA.
4. Xjenzi tal-Ikel u l-Agrikoltura: Użat biex tiġi vvalutata s-sikurezza tal-pestiċidi, l-addittivi tal-ikel, u sustanzi oħra, u biex tistudja l-effetti tossiċi tagħhom f'mudelli tal-annimali.

Vantaġġi

• Sensittività Għolja: Kapaċi jiskopri livelli baxxi ta' ħsara fid-DNA.
• Operazzjoni sempliċi: It-teknika hija sempliċi, li tagħmilha adattata għall-iskrinjar ta' produzzjoni għolja.
• Applikazzjoni Wiesgħa: Jista 'jiġi applikat għal diversi tipi ta' ċelluli, inklużi ċelloli tal-annimali u tal-pjanti.
• Sfidi ta' Kwantifikazzjoni: Filwaqt li tipprovdi dejta kwalitattiva dwar il-ħsara fid-DNA, l-analiżi kwantitattiva tiddependi ħafna fuq is-softwer u t-tekniki tal-analiżi tal-immaġni.
• Kundizzjonijiet Sperimentali: Ir-riżultati jistgħu jiġu influwenzati minn fatturi bħall-ħin tal-elettroforeżi u l-pH, li jeħtieġu kontroll bir-reqqa tal-kundizzjonijiet sperimentali.

Limitazzjonijiet

Il-Comet Assay huwa għodda imprezzabbli fir-riċerka bijomedika, ix-xjenza ambjentali, u l-iżvilupp tad-droga minħabba l-flessibbiltà u s-sensittività għolja tiegħu fl-iskoperta tal-ħsara u t-tiswija tad-DNA. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Bijoteknoloġija)joffri kamra tal-elettroforeżi orizzontali għall-assaġġ tal-kometa. Merħba għall-kuntatt magħna biex tiddiskuti dwar il-Assay Cometprotokoll.

Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) speċjalizzat fil-manifattura ta 'strumenti ta' elettroforeżi għal aktar minn 50 sena mat-tim tekniku professjonali tagħna stess u ċ-ċentru ta 'R&D. Għandna linja ta 'produzzjoni affidabbli u kompluta mid-disinn sa spezzjoni, u maħżen, kif ukoll appoġġ għall-kummerċjalizzazzjoni. Il-prodotti ewlenin tagħna huma Electrophoresis Cell (tank/chamber), Electrophoresis Power Supply, Blue LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System eċċ Aħna wkoll nipprovdu l-istrumenti tal-laboratorju bħal strument PCR, vortex mixer u ċentrifugi għal-laboratorju.

Jekk għandek xi pjan ta 'xiri għall-prodotti tagħna, jekk jogħġbok ikkuntatjana. Tista' tibgħatilna messaġġ bl-email[email protetta]jew[email protetta], jew jekk jogħġbok ċempelna fuq +86 15810650221 jew żid Whatsapp +86 15810650221, jew Wechat: 15810650221.

Jekk jogħġbok Skennja l-kodiċi QR biex iżżid fuq Whatsapp jew WeChat.